遺伝子検査

エクソンとイントロンとは何か、NCBI Genome Data Viewerで実際のTP53遺伝子を見ながら初心者向けに解説します。スプライシングやCDS、成熟mRNAとの関係、ゲノムDNAを使ったPCR・プライマー設計でエクソンとイントロンの位置を確認する理由まで紹介します。

遺伝子変異が何番exonにあるのか、NCBIを使って調べる方法を初心者向けに解説します。TP53のNM_000546.6:c.574C>Tを例に、c.表記からmRNA上の位置を確認し、変異を含むexonを特定する手順や、exon 6とcoding exon 5の違いも紹介します。

c.574C>Tは実際の配列のどこ？TP53のRefSeqを例に、NCBIでCDS開始位置を確認し、c.表記から実際の塩基位置を調べる方法を初心者向けに解説します。

TEバッファーとは何かを初心者向けに解説します。TrisがpHを安定させる仕組みや、EDTAが金属イオンをキレートしてDNAの分解を抑える理由、水やLow TEとの違い、PCRで使用する際の注意点までわかりやすく紹介します。

PCR Bufferとは何か、なぜPCRに必要なのかを初心者向けに解説します。pHとDNAポリメラーゼの関係、緩衝液の仕組み、Trisが使われる理由、KClやMg²⁺の役割まで分かりやすく紹介します。

PCRではなぜMg²⁺を使うのでしょうか？Na⁺やK⁺、同じ2価のCa²⁺では代用できない理由や、Mg²⁺ではなくMgCl₂として加える理由を初心者向けに解説。Mg²⁺だけの水溶液が難しい理由やMgSO₄との違い、dNTPとの関係も紹介します。

PCR反応液にMgCl₂が入っているのはなぜ？DNAポリメラーゼによるDNA合成にMg²⁺が必要な理由を、図を使って初心者向けに解説します。Mg²⁺が少なすぎる・多すぎる場合のPCRへの影響についても紹介します。

PCRで目的のバンドが出ないとき、なぜアニーリング温度を下げるのでしょうか。60℃から58℃・56℃・54℃へ変更した例をもとに、温度を下げると増幅しやすくなる理由、非特異的増幅との関係、複数条件から適切な温度を選ぶ考え方を初心者向けに解説します。

PCR反応液には何が入っている？Template DNA、Primer、dNTP、DNAポリメラーゼ、Buffer、Mg²⁺、水について、それぞれの役割を初心者向けにわかりやすく解説します。Master Mixやオリゴについても紹介します。

PCRで複数のプライマーを混合すると、濃度はどう変わる？20 µMのプライマーを等量混合した場合の計算から、原液の希釈、異なる比率でのprimer mix作製、PCR反応液中の終濃度まで、具体例を使って初心者向けに解説します。